· poliacrilammideil gel deve essere composto da monomero di acrilammide, materiale di partenza della polimerizzazione, catalizzatore e il diritto di miscela di sale e tampone insieme.
· acrilammidee BIS (N, N'-metilene doppia acrilammide) è la matrice di gel sotto forma di monomero.
· Il persolfato di ammonio avvia il processo di polimerizzazione dell'adesivo.La formulazione della colla richiede una soluzione di persolfato di ammonio al 10% preparata in acqua.La maggior parte delle informazioni indicavano la necessità di un utilizzo attivo.Tuttavia, la soluzione al 10% può essere mantenuta a 4°C per diverse settimane senza una significativa perdita di attività.Preparare fino a 10 ml e scartare quando la colla non riesce ad aggregarsi.
Suggerimento: la percentuale diacrilammidenel sequenziamento la colla e la colla proteica non sono la stessa cosa.Se si utilizza acrilammide preconfezionata: soluzione BIS, assicurarsi di procurarsi il flacone giusto.
· TEMED (N, N, N ', N' - tetrametil etilendiammina) è un catalizzatore, in una bottiglia marrone, posta in frigorifero.Aggiungere appena prima di versare la colla.
· Il vetro utilizzato per l'elettroforesi della poliacrilammide nell'elettroforesi deve essere lavato prima e dopo ogni utilizzo.Dopo l'elettroforesi, lavare con una spazzola morbida e un panno in acqua calda e sapone, risciacquare con acqua distillata e lasciare asciugare.
· umidità e polvere possono verificarsi con il polimero cavo.Prima dell'elettroforesi, pulire la lastra di vetro con un detergente per vetri e asciugarla con una spazzola morbida.Lavare con acqua distillata e asciugare accuratamente con una salvietta di carta.Il risciacquo con etanolo al 70% prima di pulire con la carta aiuta a pulire e ad accelerare l'asciugatura.Aggiungere successivamente i campioni di acrilammide: BIS, acqua, soluzione tampone, persolfato di ammonio, TEMED.Agitare bene e versare subito.
Non è necessario degassare la poliacrilammide prima della polimerizzazione.(L'acrilammide veniva posta sotto vuoto per rimuovere le bolle perché l'ossigeno inibisce la polimerizzazione.)
Punte campione con punto di colla orizzontale.
· Metti un pezzo di carta nera nella casella in basso, sullo sfondo nero per creare un foro campione per vedere più chiaramente.
· tampone riempito nel serbatoio della colla, appena sopra il colloide.
· se il bordo ha una luce, accendi le luci, lascia che la luce colloidale risplenda.Aspirare il campione nella pipetta.
· utilizzando un dispositivo di pipettaggio automatico.
· in 10-200 mu 1 punto mobile liquido può essere utilizzato nella maggior parte dei punti del campione.Per fori campione molto piccoli (meno di 10μ1), la lunga testa della pipetta utilizzata per il sequenziamento della colla è più comoda.
· pipettare appena immerso nel campione, inalando il fluido che si muove lentamente.Il campione potrebbe apparire appiccicoso a causa della glicerina e un pompaggio rapido potrebbe attirare bolle d'aria nella testa della pipetta.
· i campioni, dopo aver inalato la testa di pipettaggio, spostano delicatamente la testa del fluido sul bordo del tubo oppure, strofinando la carta, aspirano la testa del liquido all'esterno delle goccioline.Fare attenzione a non aspirare il campione.
Posizionare il campione nel foro del campione
· dispositivo di pipettaggio per mantenere una leggera pressione, far sì che i campioni muovano leggermente la testa del liquido in eccesso.
· la testa di pipettaggio inserita nel tampone, leggermente più in alto rispetto ai fori spot, mantiene una pressione positiva.La punta della pipetta può essere inserita in un piccolo foro.
· lentamente e costantemente i campioni fuori.La punta della pipetta viene posizionata sopra il foro del campione e il campione affonderà nel foro.Lascia che il campione affondi per riempire il foro del campione invece di spingerlo dentro.
· una volta che l'ultima goccia di campione ha la testa del liquido, il liquido si sposterà sul secondo tratto, solleverà lentamente il liquido e uscirà dal buffer
Come eseguire il campionamento della colla verticale?
· fori campione punto colla verticali formati tra due pezzi di vetro.In caso di colla molto sottile la testa della pipetta non può nemmeno essere inserita tra due lastre di vetro.Attenzione alla glicerina!Posizionare la testa della pipetta sul foro del campione e il campione affonderà nel foro.
· punto del campione prima, assicurarsi di mettere il punto verticale del foro del campione di gel di polipropilene acilico e risciacquarlo.Lavare via l'acrilammide non polimerizzata e l'acqua che potrebbe apparire sul fondo del foro del campione.L'acqua può rendere il foro del campione notevolmente più piccolo.Utilizzare una siringa da 25 ml o 50 ml e un ago di calibro 18.Versare il tampone per elettroforesi e lavare accuratamente il foro del campione.
· può essere difficile vedere il foro del campione, ma allo stesso tempo il resto è facile.Se sono presenti fori in eccesso, il tampone del campione può essere testato con blu di bromofenolo.
Orario di pubblicazione: 31 marzo 2023