· poliacrilammideIl gel deve per monomero acrilamide, materiale di partenza della polimerizzazione, catalizzatore e la destra della miscela di sale e tampone insieme.
· acrilamidee bis (n, n '- metilene doppia acrilamide) è la matrice di gel di forma monomerica.
· Processo di polimerizzazione adesiva per il persolfato di ammonio. La formulazione della colla richiede una soluzione di persolfato di ammonio al 10% preparata in acqua. La maggior parte delle informazioni ha indicato una necessità di uso attivo. Tuttavia, la soluzione al 10% può essere collocata a 4 ℃ per diverse settimane senza una significativa perdita di attività. Preparare fino a 10 ml e scartare quando la colla non si aggrega.
Suggerimento: la percentuale diacrilamidenella colla di sequenziamento e nella colla proteica non è lo stesso. Se si utilizza l'acrilamide premade: soluzione BIS, assicurati di ottenere la bottiglia giusta.
· Temed (N, N, N ', N'- Tetrametil etilendiammina) è un catalizzatore, in una bottiglia marrone, collocato in frigorifero. Aggiungi appena prima di versare la colla.
· L'elettroforesi di poliacrilammide utilizzata in vetro in elettroforesi deve essere lavato prima e dopo ogni volta. Dopo l'elettroforesi, lavare con un pennello morbido e un panno in acqua calda insaponata, sciacquare con acqua distillata e stare asciutto.
· L'umidità e la polvere possono causare con polimero cavo. Prima dell'elettroforesi, pulire la lastra di vetro con detergente in vetro e pulirla con una spazzola morbida. Lavare con acqua distillata e asciugare accuratamente con una pulizia di carta. Il risciacquo con il 70% di etanolo prima di pulire la carta aiuta a pulire e accelerare l'essiccazione. Aggiungi campioni di acrilamide in successione: bis, acqua, soluzione tampone, persolfato di ammonio, temed. Scuoti bene e versa immediatamente.
Non è necessario degere la poliacrilammide prima della polimerizzazione. (L'acrilamide veniva inserita nel vuoto per rimuovere le bolle perché l'ossigeno inibisce la polimerizzazione.)
Suggerimenti campione del punto di colla orizzontale.
· Metti un pezzo di carta nera nella scatola inferiore, sfondo nero per creare un foro di campionamento per vedere più chiaramente.
· Tampone riempito di serbatoio in colla, appena sopra il colloide.
· Se il bordo ha una luce, accendi le luci, lascia che la luce brilli colloide. Disegna il campione nella pipetta.
· Utilizzo del dispositivo di pipettatura automatica.
· In 10-200 MU 1 Il punto di spostamento del liquido può essere utilizzato nella maggior parte dei punti del campione. Per fori di campionamento molto piccoli (meno di 10μ1), la testa di pipetta lunga utilizzata per la colla di sequenziamento è più conveniente.
· Pipetting appena immerso nel campione, inalando lentamente il fluido. Il campione può apparire appiccicoso con glicerina e il pompaggio rapido può disegnare bolle d'aria nella testa della pipetta.
· I campioni dopo aver inalato la testa di pipettatura, sposterà delicatamente la testa del fluido sul bordo del tubo o la carta pulizia succhia la testa liquida fuori dalle goccioline. Fai attenzione a non succhiare il campione.
Posizionare il campione nel foro del campione
· Dispositivo di pipetta per mantenere un po 'di pressione, rendere i campioni sposta leggermente la testa liquida di overflow.
· La testa di pipettatura inserita nel tampone, leggermente più alto dei fori spot, mantiene una pressione positiva. La punta della pipetta può essere inserita in un piccolo foro.
· Lentamente e costantemente i campioni fuori. La punta della pipetta viene posizionata sopra il foro del campione del punto e il campione affonderà nel foro. Lascia che il campione affonda per riempire il foro del campione invece di spingere.
· Una volta che l'ultima goccia di campione con testa liquida, il liquido si muoverà alla seconda gamba, aumenta lentamente la mossa del liquido, spostati dal tampone
Come fare il campionamento della colla verticale?
· Fori del campione del punto di colla verticale formati tra due pezzi di vetro. In colla molto sottile, la testa della pipetta non può nemmeno essere inserita tra due piastre di vetro. Guarda la glicerina! Metti la testa della pipetta sul foro del campione e il campione affonderà nel foro.
· Campione di punti prima, assicurarsi di mettere il punto verticale del foro del campione di gel di polipropilene acilico è sciacquato. Lavare via l'acrilamide non poliimerizzata e l'acqua che può apparire sul fondo del foro del campione. L'acqua può rendere il foro del campione significativamente più piccolo. Utilizzare una siringa da 25 ml o 50 ml e un ago da 18 calibri. Versare il tampone di elettroforesi e scaricare con cura il foro del campione.
· Può essere difficile vedere il foro del campione, ma allo stesso modo, il resto è facile. Se ci sono fori in eccesso, il tampone del campione può essere testato con blu bromofenolo.
Tempo post: MAR-31-2023